免疫组化试剂盒（抗兔二抗）

▎ 产品简介

该试剂盒是一个特别敏感的两步法免疫组化试剂盒，适用于一抗来源为兔的抗体。其中二抗为辣根过氧化物酶与山羊抗兔IgG结合而成的分子，该分子与兔来源一抗(先与抗原反应)结合，结合后的大分子即标记有辣根过氧化物酶，再与DAB反应，得到棕黄色沉淀。由于该系统不含生物素和链霉亲和素，所以不受内源性生物素干扰，染色背景非常清晰。

▎ 保存条件

整套试剂盒-20℃保存。二抗-20℃保存;DAB稀释液和50×DAB原液4℃保存;有效期12个月

▎ 建议稀释比

DAB稀释液               12.5 mL
50×DAB原液              250 μL
HRP标记山羊抗小鼠二抗        100 μL

▎ 注意事项

1.如果为冰冻切片或细胞爬片，请将标本固定后自第3步开始。
2.以上步骤仅供参考，请根据实际情况调整。

▎ 使用方法

1.常规切片脱蜡至水。
2.于修复液中修复。一般为Tris-EDTA或柠檬酸修复液。
3.加过氧化物酶阻断剂(常用3%过氧化氢)于组织上避光孵育15分钟。蒸馏水冲洗。
4.PBS冲洗三次，每次5分钟。
5.浓度为3%的BSA(pH7.2-7.4的PBS缓冲液配制)或正常山羊血清工作液于组织上孵育30分钟，封闭非特异性结合位点。
6.甩净封闭液，每张切片加入50-100 μL一抗工作液，4℃过夜。
7.PBS冲洗三次，每次5分钟。
8.每张切片加入50-100 uL二抗工作液(二抗原液G1216-3用pH7.2-7.4的PBST以1:200的比例稀释)，室温下孵育30-60分钟。
9.PBS冲洗三次，每次5分钟。
10.DAB工作液配制：每1 mLDAB稀释液(G1216-1)中加入20μL 50×DAB原液(G1216-2)，混匀备用。也可根据试验结果再适当稀释后使用。
11.每张切片加50-100 μL新鲜配制的DAB工作液，室温下孵育。显微镜控制具体显色时间。
12.显色完全后，蒸馏水或自来水冲洗。苏木素复染，0.1%盐酸分化，自来水冲洗返蓝。
13.切片经过梯度酒精(70-100%)脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。