关于多糖单糖组成检测方法|茁彩生物

单糖组成分析是研究多糖结构、性质及构效关系的基础。其研究中主要包括多糖水解的方法和条件、衍生化方法和单糖检测方法，如图所示。常用的水解方法主要有酸水解法和酶解法，此外还有氧化降解法、超声降解法、辐射降解法等。由于单糖不具有紫外与荧光吸收，检测时常将其进行衍生化处理。单糖组成最常用的检测方法一般有4种，分别是气相色谱法 (GC)、高效液相色谱法 (HPLC)、离子色谱法 (IC) 和薄层色谱法 (TLC)。

GC法较早用于分析多糖单糖组成，方法灵敏度高，各单糖的色谱峰的分离度良好。由于单糖不具有挥发性，采用GC法测定时，常对单糖进行硅烷化或乙酸酯化处理，使其成为易挥发且对热稳定的衍生物。GC法只适合测定中性多糖，不适宜测定糖醛酸及N-乙酰氨基糖的检测。GC法测定多糖的单糖组成，常用的检测器包括氢火焰检测器(FID)、质谱检测器 (MS)。

HPLC法

HPLC法是测定多糖单糖组成的常用方法之一，较GC法更适用于单糖组成较为复杂的多糖检测。HPLC法常使用键合相硅胶柱（如C18柱）和氨基柱。目前基于离子交换、空间排阻、配位交换、分配吸附等多种分离原理的新型糖分析柱也日益应用广泛，如SugarS系列、SugarKS系列、AsahipakGS-220HQ、AsahipakNH2P系列色谱柱等。HPLC法检测单糖时，常用检测器主要有紫外检测器(VWD)、荧光检测器 (FLD)、示差折光检测器(RID)、蒸发光散色检测器(ELSD)、电喷雾检测器(CAD)、电化学检测器 (ECD)、二极管阵列检测器(DAD)，各检测器特征比较如表所示。根据所用检测器的不同，可分为衍生化后测定和直接测定2种情况。一是联用DAD、VWD或FLD时，水解后的单糖需衍生化处理才能被测定，实验室常用的衍生试剂如1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）。此法可检测酸性、中性和碱性多糖的单糖组成，但用于酮糖测定的衍生化法很少；二是联用RID、ELSD、ECD、CAD时，可无需对单糖进行衍生化。

表：HPLC法联用的各检测器特征比较 

IC法

IC法是一种新型液相色谱技术，基于离子型化合物中的离子成分，可与离子柱表面的带电荷基团发生可逆性交换的原理，实现各化合物的分离。多糖水解后可直接通过IC法测定其单糖组成。

TLC法

使用TLC法测定单糖组成时，多糖水解后无需衍生化。TLC法常用薄层板为硅胶G板和微晶纤维素板、活性炭层析柱。TLC法有操作方便、分离快速、设备简单等优点，但其对单糖的分离度低，实验条件如温度、湿度、操作者的实验水平等，对实验结果的影响较大，在灵敏度和准确度上低于HPLC法，常用作定性分析。