外泌体的主流共识---电镜、NTA和WB实验
2023-08-11
外泌体的形状是杯状或茶托形，可以通过电镜观察形态进行初步确定，外泌体的粒径大小在30-120nm左右，通过NTA可以检测到粒径大小，外泌体本身具有一些特殊的标志蛋白，通过WB可以检测出来。
目前鉴定外泌体主要包括三方面实验，但是三方面实验在鉴定外泌体的存在、数量和完整性上分别存在一些缺陷。
可以直观的看到粒子的形态，因此可以用于鉴定外泌体的存在和完整性，但是包括支原体、铁蛋白聚团、聚乙二醇蛋白聚团、溶酶体等的电镜图片与外泌体都十分相似，并且电镜只能展示局部景象。因此，电镜成像无法区分外泌体及形态相近的纳米粒子，且不能反映样品中的外泌体数量。
是一种测算粒子群体直径分布和粒子数量的计算方法，它通过光学原理感知粒子的存在，因此可以确认外泌体样品中的“外泌体”数量和直径的群体特征，但是无法确认检测到的粒子是否为外泌体，不能反映粒子形态，无法将外泌体和其他纳米粒子区分开。因此NTA不能确认外泌体的真实存在和外泌体的完整性。
可以鉴定外泌体中存在的特定蛋白，WB检测外泌体标志蛋白可以说明外泌体成分的存在。但是目前的这些标志物蛋白只是会在外泌体里富集，而并不是外泌体所特有的，诸如CD63、ALIX等在细胞中都有，在一些细胞碎片、溶酶体、胞内体中也大量存在。因此，WB仅能证实外泌体成分的存在，无法确认外泌体的数量和完整性。
因此，通过三个实验的相互佐证来确认外泌体的存在、数量和完整性。当且仅当三个实验结果都正常（即电镜看到经典结构，WB检测到外泌体标志物的富集，NTA测算直径分布符合外泌体定义），才能确认研究者成功的分离纯化了外泌体，基于这一成功的分离方法所得到的后续研究结果才能认为是外泌体相关的研究结果。其实，最好完美的鉴定方法应当是免疫电镜结合NTA，但是免疫电镜的难度过高，因此最终形成了电镜、NTA和WB三个实验鉴定外泌体的主流共识。