▶影响ELISA试剂盒曲线的因素
2022-02-24
标准曲线质量决定实验成败
标准曲线做的好与坏会直接影响到实验的结果，甚至是关系到实验的成败。我公司技术人员在处理售后的问题中，有不少科研朋友咨询曲线的问题。
四大类曲线问题诊断
⚠️ 一：OD值异常（偏离预期范围）
排查清单：
可能原因 | 专业解决方案 |
试剂盒未回温 | 试剂盒回温到25℃ |
温度控制不好 | 控制正确温度 |
孵育时间不准确 | 孵育时间不准确 |
洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长 | 洗涤次数增 加，洗涤4-5次，每孔250ul，然后拍干 |
阳光直射，对着风直接吹 | 避风避光 |
酶标仪的波长错误 | 酶标仪的波长450nm |
抗体的稀释错误 | 正确的稀释抗体 |
特级提示：
当使用普通蒸馏水时，建议替换为娃哈哈纯净水（pH 5.0-7.0）
⚠️ 二：白板现象（无显色反应）
1、洗涤液配制错误，正确的配制洗涤液；
2、少加液体（错加液体），正确的步骤加液体。
⚠️ 三：无浓度梯度
1、标准品也污染，换标准品点板；
2、OD值不正常，控制温度时间在做一次；
3、人为点板，不要点板。
⚠️ 四：线性不佳（R²<0.95）
OD值不正常，控制温度时间在做一次。