▶ELISA 测定中可能会出现的问题及解决方法
2022-02-24
| 问 题 | 可能的原因 | 解决方法 |
| 1.非常弱的结果 | （1）温育的时间或温度不够；（2）显色反应时间太短；（3）所用配制缓冲液的蒸馏水有问题；（4）加入抗体/酶的稀释液浓度太低；（5）酶标仪滤光片不正确；（6）不正确的试剂储存方式；（7）试剂盒没有充分平衡；（8）移液器吸液量不足，吸嘴内壁挂水太多或内壁不清洁。 | 校正温育箱温度；校正定时钟准确定时；使用新鲜合格的蒸馏水；按照说明书保存试剂盒和准确配制工作液；试剂室温平衡至少 20分钟，确保所有试剂已平衡至室温（约25℃）；校正移液器，吸嘴要配套，装吸嘴时要紧密，吸嘴内壁要清洁，最好一次性使用。
|
|
|
|
|
|
|
| 2．标准曲线和测定的重复性差 | 这是典型的由测定操作引起的问题，包括（1）加样本及试剂量不准；孔间不一致；（2）加样过快，孔间发生污染；（3）加错样本；（4）加样本及试剂时，加在孔壁上部非包被区；（5）不同批号试剂盒中组分混用；（6）温育时间、洗板、显色时间不一致；（7）孔内污染杂物；（8）酶标仪滤光片不正确；（9）试剂/样品没有混匀；（10）血清标本未完全凝固即加入，反应孔内出现纤维蛋白凝固或残留血细胞，易出现假阳性反应等。 | 重复某一样品时，加样时间尽可能与第一次接近；重复测定标本，操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致，以排除这些因素造成的不一致的可能性；样品稀释前应充分混匀；尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴。 |
| 3．白板（阳性对照不显色） | （1）漏加酶结合物；（2）洗板液配制中出现问题，如量筒不干净，含酶抑制物（如叠氮钠）等；（3）添加的试剂错误或者被遗漏；（4）试剂过期； | 请按说明书所示稀释倍数配制；注意不要漏加；每次加液前均应核对标签。 |
| 4．空白背景高 | （1）洗板不干净；（2）显色液变质；（3）试剂过期；（4）不正确的试剂稀释液，如加酶的浓度过高； | 浓缩洗液准确配制；50 倍浓缩洗涤液如有结晶则应让结晶于室温全部溶解后再量取稀释；充分洗涤，彻底拍干；加样或加酶拍板
|