▶ELISA 测定中可能会出现的问题及解决方法

非常弱的结果

（1）温育的时间或温度不够；

（2）显色反应时间太短；

（3）所用配制缓冲液的蒸馏水有问题；

（4）加入抗体/酶的稀释液浓度太低；

（5）酶标仪滤光片不正确；

（6）不正确的试剂储存方式；

（7）试剂盒没有充分平衡；

（8）移液器吸液量不足，吸嘴内壁挂水太多或内壁不清洁。

校正温育箱温度；

校正定时钟准确定时；

使用新鲜合格的蒸馏水；

按照说明书保存试剂盒和准确配制工作液；

试剂室温平衡至少 20分钟，确保所有试剂已平衡至室温（约25℃）；

校正移液器，吸嘴要配套，装吸嘴时要紧密，吸嘴内壁要清洁，最好一次性使用。

标准曲线和测定的重复性差

这是典型的由测定操作引起的问题，包括

（1）加样本及试剂量不准；孔间不一致；

（2）加样过快，孔间发生污染；

（3）加错样本；

（4）加样本及试剂时，加在孔壁上部非包被区；

（5）不同批号试剂盒中组分混用；

（6）温育时间、洗板、显色时间不一致；

（7）孔内污染杂物；

（8）酶标仪滤光片不正确；

（9）试剂/样品没有混匀；

（10）血清标本未完全凝固即加入，反应孔内出现纤维蛋白凝固或残留血细胞，易出现假阳性反应等。

重复某一样品时，加样时间尽可能与第一次接近；

重复测定标本，操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致，以排除这些因素造成的不一致的可能性；

样品稀释前应充分混匀；

尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴。

白板（阳性对照不显色）

（1）漏加酶结合物；

（2）洗板液配制中出现问题，如量筒不干净，含酶抑制物（如叠氮钠）等；

（3）添加的试剂错误或者被遗漏；

（4）试剂过期；

请按说明书所示稀释倍数配制；

注意不要漏加；

每次加液前均应核对标签。

（1）洗板不干净；

（2）显色液变质；

（3）试剂过期；

（4）不正确的试剂稀释液，如加酶的浓度过高；

浓缩洗液准确配制；

50 倍浓缩洗涤液如有结晶则应让结晶于室温全部溶解后再量取稀释；

充分洗涤，彻底拍干；

加样或加酶拍板